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pcr扩增的基本原理

基本原理：PCR技术的基本原理类似于DNA的天然copy过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。DNA的半保留复1制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则copy成同样的两分子拷贝。

在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定***的体外复1制。

随机引物扩增技术(arbitrary primedPCR, AP- PCR)

AP-PCR技术通过随意设计或选择一个非特异性引物.在PCR反应体系中.首先在不严格条件下使引物与模板中许多序列通过错配而复性。如果在两条单链上相距一定距离有反向复性引物存在,则可经Taq酶的作用使引物延伸而发生DNA部分片段的扩增。经一至数轮不严格条件下的PCR循环后，再于严格条件下进行扩增。扩增的产物经DNA测序凝胶电泳分离后.经放1射性自显影或荧光显示即可得到DNA***图。AP-PCR用于肿1瘤的******、******的分离;菌1种、菌株及不同物种的鉴定;遗传作图;不同分化程度或某些不同状态下的***的***表达差异等方面的研究。

PCR有哪些应用领域？

***表达

通常可通过PCR来检测不同细胞类型、***和生物体在特定时间点的***表达差异。首先，从目标样品中分离出RNA并将mRNA逆转录成cDNA。随后，通过由PCR扩增的cDNA数量，确定mRNA的初始水平。这一过程也被称为逆转录PCR。

终点PCR 可通过凝胶里的扩增产物条带强度对RNA的表达进行定量（一种半定量方法）。例如，对起始cDNA进行连续稀释并扩增。通过凝胶电泳使不同起始量的终点PCR得率可视化，然后对条带强度进行定量，并以管家***为参照进行标准化，预估扩增靶点的相对表达水平。如今，终点PCR已基本被实时PCR 或qPCR 取代了，因为它们可获得和的***表达定量结果。

PCR技术不仅可用于基础研究，还适用于日常的临床诊断、法***调查和农业生物技术研究。这些应用要求可靠的性能、及时的灵敏度和严格的标准。因此，所使用的PCR仪和PCR***必须符合这些要求和目的。

分子诊断应用包括***检测、致***突变检测以及感1染性***检测。在法***中，利用 PCR进行人类身份鉴定是通过对特别的短串联重复序列（STR）进行扩增而区分个体的。在农业学中，PCR在食物病原体检测、育种植物***分型和 GMO测试中具有重要作用。