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发布时间:2021-12-18 01:46:31






长***组序列、特别是包含大的***簇的那些的克1隆对于产生medicine和生物燃料的合成生物学和***工程工作特别重要。传统的基于PCR的克1隆方法通常受限于DNA模板的长度和GC含量:标准的PCR反应常规产生至多10 kb的片段,而更长的PCR产物需要反应条件的繁琐优化,并且甚至在理想条件下,通常受限于35 kb5。或者,可通过装配多个短片段,例如重叠PCR产物或化学合成的DNA寡聚物,产生长的目的***组序列,但这样的方法趋于耗时和昂贵,特别是对于获得长于50 kb的序列(其通常需要3-5阶段,每个包含多个装配事件)6,7。获得长的***组序列的另一方法是通过***组DNA的限制性酶消化。
遗传控制中大的困难并不是DNA的,而是需要被的特异DNA段的分离 。如果以***为目的,特异DNA段的分离将大大有助于获得与遗传信息同样多的相关的***产物,一般说这些***产物均为蛋白质多肽,因此抗该蛋白质的对于测定和沉淀蛋白质及其前体有重要用途,甚至可用于了解蛋白质分子量 。AMV反转录酶和MLV反转录酶都必须有引物来起始DNA的合成。cDNA合成的引物是与真核细胞mRNA分子3’端poly(A)结合的12~18个核苷酸长的oligo(dT)。
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